澳洲胎牛血清是細胞培養中重要的天然培養基。它是采自5-8個月胎齡牛胚胎中的胎血。此時胎牛各臟器正處生長分化階段,血中含有豐富的生長發育因子,非常適合各種細胞的培養。 因此,如何在使用過程中保護這些因子的活性,達到z大的細胞培養效果,就需要正確地使用胎牛血清。
正確地使用澳洲胎牛血清可分為以下四個方面:
1.正確儲存,避免反復凍融
1)血清在-20°C凍存。
2)血清避免反復凍融,以免降低因子活性。如一次用不完,應進行分裝。
3)血清和培養基應盡可能“現用現配”,配好的培養液,應于一周內用完。
4)血清避免在4°C或更高溫度靜置過久,否則會破壞血清中有效活性成分,影響血清品質。
2. 正確的融化
目前市面上比較流行的【血清融化三步法】可更大限度地保存血清中因子的活性,不會產生沉淀,同時能縮短血清融化時間。
3. 關于胎牛血清的滅活
真正的胎牛血清因為胎牛沒有形成有效補體,如果針對補體滅活的話,就不需要。其他情況根據實驗設計來決定。
4.胎牛血清的濃度
澳洲胎牛血清通常是以2%~20%的比例加到基礎培養基中,混合后配成*培養基。曾有文獻報道,不同的血清濃度對細胞存在一定的影響,尤其是干細胞和原代細胞。具體合適濃度需要用戶根據自己的實驗來確定,以既保證培養的效果,又避免血清的浪費。
值得一提的是,血清都是在認證的廠房中生產,經過3次0.1μm過濾,出廠經過檢測并且會使用三種以上的細胞株進行培養測試及無菌檢測,污染幾率非常低。通常細胞污染有非常多的可能性,根據協助使用者進行分析檢測,結果表明絕大部分都是因人為操作失誤導致污染。因此買來的血清不需要再次進行過濾。